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如何保证核酸浓度检测结果的准确性？ ——NanoDrop超微量分光光度计仪器解析

2020-03-02

NanoDrop超微量分光光度计，是分子生物学实验室常见仪器之一。仪器外观小巧，设计精妙，仅需1µl样品，就能进行核酸、蛋白等浓度测定。仪器操作简单，使用方便。无数生物领域科研工作者都能熟练使用超微量分光光度计。

那么，超微量分光光度计进行核酸浓度检测的原理是什么呢？作为超微量分光光度计中广为人知的品牌，NanoDrop又是如何保证核酸检测结果的准确性的呢？就由小编为您解析吧。

一、超微量分光光度计原理

当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时，其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比，符合朗伯-比尔定律A=lg(1/T)=Kbc，其中K为摩尔消光系数，每种物质具有固定的摩尔消光系数。

核酸的更大吸收波长为260nm。因此，当一束260nm的光线透过核酸样本时，会产生光吸收。当核酸样本厚度（光程）固定时，吸光度和核酸浓度成正比。所以，仪器只需检测出核酸样本的A260，便可轻松换算出浓度值。

二、NanoDrop如何保障检测结果准确性

目前，NanoDrop已经更新到第三代，包括NanoDrop One和NanoDrop OneC两个型号。NanoDrop OneC比NanoDrop One多一个比色皿检测模块。NanoDrop One/OneC的超微量检测采用基座设计，使用者将1-2µl样品滴在基座上，降下检测臂，即可实现浓度测量。检测时，基座下的步进马达会上下移动，自动调节5个光程，以满足不同浓度样本的检测。仪器会自动匹配一个更适合的光程，保证检测结果的精确程度。

此外，NanoDrop One/OneC的污染物分析、实时技术支持、上样液柱完整性监测等技术共同打造了一个智能样本分析系统，为核酸浓度检测准确性保驾护航。

1、污染物分析

核酸样本通过检测A260换算核酸浓度，通过A260/A230和A260/A280的值分析样本纯度。纯度比值A260/A230和A260/A280过高或过低都表明核酸样本纯度异常。这种判断标准是基于核酸样本特殊的吸收光谱而确立的。如果核酸样本中含有的杂质的吸收光谱和核酸吸收光谱类似时，这种判断标准的准确性则会大打折扣。例如，当核酸样本中有少量苯酚残留时，纯度比值并不会产生明显变化，且苯酚在260nm处的吸光度还会造成核酸样本的A260虚高。因此，当传统分光光度计遇到此类样本时，并不能给出正确的结果。

NanoDrop One/OneC具有智能污染物分析技术，不仅仅靠吸光度比值判断样本纯度，还能够分析出核酸样本中的污染物种类，并给出更接近核酸真实浓度的矫正后浓度。

2、实时技术支持

当检测出样品的纯度比值异常时，NanoDrop One/OneC具有导向性实时技术支持功能，提供及时的样本信息反馈和可供参考的解决方案。

3、液柱完整性监测

当样品液滴在检测过程中出现坍塌，不能形成完整的液柱时，仪器会停止检测。当液柱中含有气泡时，仪器也会报警。因为气泡会导致光衍射，影响光谱图的质量，以及浓度计算的准确性。

NanoDrop One/OneC在传统超微量检测技术基础上增加了上述功能，优化的系统使得核酸浓度检测更准确、更轻松，硬核保障核酸浓度检测结果的准确性。

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