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KASP SNP分型技术经验分享（二）

2017-09-26

自推出该专题以来，受到超多的点赞和围观，更是让小编觉得这个专题有意义，故这次换了一辆大巴，欢迎更多的同道中人及感兴趣的朋友上车…

背景知识
KASP技术的反应过程是PCR，反应体系中除了gDNA外，包含Assay mix和Master mix，那么Master mix里面除了关键性的带有荧光的接头序列、镁离子、dNTP等外，还含有ROX内参荧光。

经常就会有人问小编，这个ROX内参具体有什么作用？像做western Blot或qPCR那样使用内参蛋白／内参基因用来校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性吗？答案差不多，但区别是KASP是个定性去检测SNP分型的技术，具体来看看原始说明：

“The passive reference dye ROX is also used to allow normalization of variations in signal caused by differences in well-to-well liquid volume.  ”

相信大家已迫不及待想看看这均一化处理前后的变化、差别了吧，直接上图…

Normalization前后对比.png

有没有，从上图cluster plot比较中可清楚看出Normalization的重要性，均一化处理后的结果更加明确、漂亮，这用来发文章绝对亮眼。注：上述实验是手动人工做的Trial kit试剂盒，数据是通过KlusterCaller软件分析的。

背景知识
KASP技术的优势之一就是对仪器的兼容性很好，咱们实验室普通的荧光定量PCR仪或者酶标仪即可，包含FAM、HEX（或VIC也行）、ROX这几种通道。

故如果有老师们自己购买试剂在实验室里使用KASP技术时，记得勾选ROX通道进行Normalization处理哦，注意：使用Bio-rad的CFX系列的定量仪时，仪器本身可以检测ROX荧光，但没办法做Normalization处理，故即使勾选了也没用，但如果您想在klusterCaller软件上分析结果时，务必勾选ROX通道。

Biorad ROX说明.png

往期分享

KASP SNP分型技术经验分享（一）

http://www.genecompany.com/index.php/Home/Exchange/shownewapply/id/92.html

技术负责人：

成小姐 Tel／WeChat：18817595251

Email：Shirley_cl@baygene.com